鸚鵡熱衣原體(Chlamydia psittaci, C.psittaci, Cps) 形狀呈圓形或橢圓
形，直徑約 0.3μm 左右，在細(xì)胞空泡中增值，形成疏松包涵體。鸚鵡熱衣原體
是自然性疫源，可在哺乳動(dòng)物之間傳播。鸚鵡熱衣原體和沙眼衣原體(C.
trachomatis, Ct)、肺炎衣原體(C.pneumoniae, Cpn)和反芻動(dòng)物衣原體(C.
pecorum, Cpe)是四種最常見的衣原體。衣原體可以引起哺乳動(dòng)物的流產(chǎn)、肺炎、
腸炎、腦脊髓炎、多漿膜炎、多關(guān)節(jié)炎、角膜結(jié)膜炎、尿道炎及雞的輸卵管炎等
癥。早期、快速、簡(jiǎn)便檢測(cè)衣原體對(duì)診治、延緩該病的傳播和預(yù)防并發(fā)癥顯得尤
為重要。本產(chǎn)品即是基于熒光定量 PCR 法的鸚鵡熱衣原體快速檢測(cè)試劑盒。它
具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 根據(jù) Cps 主要外膜蛋白(MOMP)基因的保守序列設(shè)計(jì)引物，引物經(jīng)過優(yōu)化，
特異性高。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 100 bp。
3. 熒光定量 PCR 檢測(cè)，所含 SYBR Green I 只與雙鏈 DNA 結(jié)合，反應(yīng)特異
性強(qiáng)。
4. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

運(yùn)輸及保存:

使用方法:

一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)
鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體
檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃
度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品
或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)
品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA
片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到
10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7
拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充
分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5
拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6
個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個(gè)
樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，
并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
三、PCR 檢測(cè)（20 μL 體系）
1. 在 PCR 管中加入下列成分（待測(cè)樣品需要做三次重復(fù)，下表只列出一次）：
成分 樣品 陰性對(duì)照
2×qPCR Mix 10 μL 10 μL
Cps DNA 模板 1-5 μL 無
陽性對(duì)照 無 無
自備 1×ROX (見注) 2 μL 2 μL
Cps 專一性引物一（正向引物） 1 μL 1 μL
Cps 專一性引物二（反向引物） 1 μL 1 μL
補(bǔ)水到 20 μL
注: 僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照，其他熒光
PCR 儀器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、
MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）
不需要使用 ROX。
2. 建議 PCR 反應(yīng)參數(shù)（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）
過程 溫度 時(shí)間
活化 95℃ 20 s
PCR 反應(yīng)
（40 個(gè)循環(huán)）
95℃ 5 s
60℃ 25 s
熔解曲線分析
95℃ 15 s
60℃ 1 min
95℃ 15 s
60℃ 15 s
3. 數(shù)據(jù)采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合
DNA 時(shí)，最大吸收光譜在 471nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的最大吸收光譜在 500nm，
最大發(fā)射光譜在 530nm。
四、數(shù)據(jù)處理
以 Cps 陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再
以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過待測(cè)樣品的 Ct 值計(jì)算
出樣品 DNA 的濃度。