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產(chǎn)品中心
相關(guān)產(chǎn)品
PCR檢測試劑盒
商品屬性
| 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
|
單增李斯特菌prfA基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法) |
50T |
YS-P014998 |
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光。
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨PCR試劑盒的有效期一般為1年，這是指在適當(dāng)?shù)膬Υ鏈囟认隆：怂釘U(kuò)增部分的試劑一般要貯存于-20℃下，產(chǎn)物檢測部分試劑則貯存于2-8℃。盡量避免反復(fù)凍融。
【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 閾值(Threshold)設(shè)定：將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
2. 陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陽性，有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，Ct值應(yīng)小于等于35；
3. 以上要求需在一次實(shí)驗(yàn)中同時滿足，否則該次實(shí)驗(yàn)視為無效。
【結(jié)果判斷】
2.可疑：有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，且38≤Ct<40，此時樣本為可疑樣本；對于可疑樣本建議復(fù)核一次，若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴(kuò)增期，則判定為陽性，否則判定為陰性；
3. 陰性：無指數(shù)擴(kuò)增期，Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
2. 試劑運(yùn)輸、保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，可能會導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
PCR反應(yīng)的特異性：
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
單增李斯特菌prfA基因熒光PCR檢測其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
